T-lymphocyte-expressing inflammatory cytokines underlie persistence of proteinuria in children with idiopathic nephrotic syndrome / Os linfócitos T que expressam citocinas inflamatórias são subjacentes à persistência de proteinúria em crianças com síndrome nefrótica idiopática

Abstract Objective: There is evidence of an important role of immune system changes in the triggering and maintenance of idiopathic nephrotic syndrome (INS). The aim of this study was to investigate the expression of cytokines in lymphocyte populations of patients with INS in comparison to healthy individuals, according to proteinuria. Methods: This cross-sectional study included 44 patients with INS and eight healthy children, matched for age and sex (controls). Patients were subdivided according to proteinuria: persistent proteinuria or partial remission (PP ≥ 300 mg/24 h, n = 17) and low proteinuria or complete remission (LP < 300 mg/24 h, n = 27). Ex vivo analysis of peripheral blood leukocytes by flow cytometry was performed using surface markers for T-lymphocytes, TCD4, TCD8, natural killer (NK) cells, NKT, and B-lymphocytes. Frequencies of intracellular cytokines were analyzed in these cells. Results: The frequencies of B-lymphocytes, NK cells, and NKT cells were lower in INS than in controls, whereas INS patients had a higher frequency of CD4+tumor necrosis factor (TNF)-α+ cells than controls. Cytotoxic-T-lymphocytes expressing IFN-γ were lower in INS than in controls. Patients with PP showed higher frequencies of CD4-T-lymphocytes expressing IFN-γ and TNF-α than controls. CD8-lymphocytes expressing TNF-α were increased in PP group when compared with LP and controls, while CD8+interferon (IFN)-γ+ cells were lower than in LP and in controls. Conclusion: Regardless the level of proteinuria, INS patients had increased expression of TNF-α in CD4-lymphocytes and reduced expression of IFN-γ in CD8-lymphocytes. Persistence of proteinuria was associated with higher levels of inflammatory markers.

Resumo Objetivo Há comprovação do importante papel das alterações no sistema imunológico no desencadeamento e manutenção da síndrome nefrótica idiopática (SNI). O objetivo deste estudo foi investigar a expressão das citocinas em populações de linfócitos de pacientes com SNI em comparação a indivíduos saudáveis e de acordo com a proteinúria. Métodos Este estudo transversal incluiu 44 pacientes com SNI e oito crianças saudáveis, pareados por idade e sexo (controles). Os pacientes foram subdivididos de acordo com a proteinúria: proteinúria persistente ou remissão parcial (PP ≥ 300 mg/24 h, n = 17) e proteinúria baixa ou remissão completa (PB < 300 mg/24 h, n = 27). A análise ex vivo de leucócitos no sangue periférico por citometria de fluxo foi feita utilizando marcadores de superfície para linfócitos T, TCD4, TCD8, células natural killer (NK), linfócitos NKT e B. As frequências das citocinas intracelulares foram analisadas nessas células. Resultados A frequência dos linfócitos B, células NK e células NKT foi menor em pacientes com SNI do que nos controles, ao passo que os pacientes com SNI apresentaram maior frequência de células CD4+fator de necrose tumoral (TNF)-α+ do que nos controles. Os linfócitos T citotóxicos que expressam interferon (IFN)-γ foram menores nos pacientes com SNI do que nos controles. Os pacientes com PP mostraram maiores frequências de linfócitos T CD4 que expressam IFN-γ e TNF-α que os controles. Os linfócitos CD8 que expressam TNF-α apresentaram aumento no grupo com PP, em comparação aos com PB e os controles, apesar de as células CD8+IFN-γ+ serem mais baixas nos pacientes com PB e nos controles. Conclusão Com relação ao nível de proteinúria, os pacientes com SNI apresentaram aumento na expressão de TNF-α nos linfócitos CD4 e expressão reduzida de IFN-γ nos linfócitos CD8. A persistência da proteinúria foi associada a maiores níveis de marcadores inflamatórios.

Urinary cytokine profiles according to the site of blockade of the renin-angiotensin system in nephrectomized rats / Perfil de citocinas urinárias de acordo com o local de bloqueio do sistema renina angiotensina em ratos nefrectomizados

Abstract Introduction: It is still unknown how the pharmacological inhibition of the Renin Angiotensin System (RAS) impacts the levels of inflammation and fibrosis biomarkers. Objective: This study sought to evaluate the effect of enalapril, candesartan and aliskiren on urinary levels of cytokines in a model of chronic kidney disease (CKD). Methods: Male Wistar rats were submitted to surgical removal of ¾ of renal parenchyma to induce CKD (¾ nephrectomy), or subjected to sham surgery (control). Animals were then randomized into five groups: Sham surgery receiving vehicle; ¾ Nephrectomy receiving vehicle; ¾ Nephrectomy receiving enalapril (10 mg/kg); ¾ Nephrectomy receiving candesartan (10 mg/kg) and ¾ Nephrectomy receiving aliskiren (10 mg/kg). Urine output, water intake, mean arterial pressure (MAP) and urinary concentrations of creatinine, urea, albuminuria, Na+, K+, interleukin (IL) -1β, IL-6, IL-10 and transforming growth factor beta (TGF-β) were measured. Results: Nephrectomy significantly impaired renal function, increased MAP and altered the levels of all evaluated cytokines in urine. Enalapril, candesartan and aliskiren improved renal function and decreased MAP and IL-6 when compared to vehicle-treated nephrectomized group. Candesartan and aliskiren decreased IL-1β, while only candesartan reduced TGF-β and only aliskiren increased IL-10. Conclusion: Enalapril, candesartan and aliskiren presented similar effects on improving renal function and reducing MAP and urinary levels of IL-6 in rats with CKD. On the other hand, cytokine profile differed according to the treatment, suggesting that differential mechanisms were triggered in response to the site of RAS blockade.

Resumo Introdução: Ainda não se sabe como a inibição farmacológica do Sistema Renina Angiotensina (SRA) afeta os níveis de biomarcadores de inflamação e fibrose. Objetivo: Este estudo pretendeu avaliar o efeito de enalapril, candesartan e alisquireno sobre os níveis urinários de citocinas em um modelo de doença renal crônica (DRC). Métodos: Ratos Wistar machos foram submetidos à remoção cirúrgica de ¾ do parênquima renal para induzir DRC (nefrectomia), ou submetidos à cirurgia fictícia (controle). Animais foram então randomizados em cinco grupos: Cirurgia fictícia recebendo veículo; Nefrectomia recebendo veículo; Nefrectomia recebendo enalapril (10 mg/kg); Nefrectomia recebendo candesartan (10 mg/kg) e Nefrectomia recebendo alisquireno (10 mg/kg). Débito urinário, ingesta hídrica, pressão arterial media (PAM) e concentrações urinárias de creatinina, ureia, albumina, Na+, K+, interleucina (IL) -1β, IL-6, IL-10 e fator de transformação e crescimento beta (TGF-β) foram medidas. Resultados: A nefrectomia comprometeu significativamente a função renal, aumentou a PAM e alterou os níveis de todas as citocinas avaliadas na urina. Enalapril, candesartan e alisquireno melhoraram a função renal e diminuíram a PAM e a IL-6 quando comparado aos grupo de animais nefrectomizados tratados com veículo. Candesartan e alisquireno reduziram IL-1β, enquanto somente candesartan diminuiu o TGF-β e somente alisquireno aumentou a IL-10. Conclusão: Enalapril, candesartan e alisquireno apresentaram efeitos similares em relação à melhora da função renal e redução da PAM e dos níveis urinários de IL-6 em ratos com DRC. Por outro lado, o perfil de citocinas diferiu de acordo com o tratamento, sugerindo que diferentes mecanismos sejam desencadeados em resposta ao local de bloqueio do SRA.